Desthiobiotin-PEG11-NHS ester 是一種結合(hé)了(liǎo)脫(tuō)硫生物素(sù)（Desthiobiotin），十一(yī)聚(jù)乙(yǐ)二醇鏈(liàn)（PEG11）和N-羥(qiǎng)基(jī)琥珀酰(xiān)亞(yà)胺酯(zhǐ)（NHS Ester）功(gōng)能的化(huà)學試劑(jì)，在生物化(huà)學和分(fēn)子生物學(xué)領(lǐng)域(yù)具有(yǒu)廣泛應用。

結構(gòu)式(shì)：

一，化(huà)學結構與(yǔ)特(tè)性(xìng)

1. 脫硫(liú)生物(wù)素(sù)（Desthiobiotin）：

• 是生物素(sù)（Biotin）的硫原子缺失(shī)衍(yǎn)生(shēng)物(wù)，保留(liú)了生物(wù)素(sù)與親(qīn)和素（Avidin）或鏈黴(méi)親和(hé)素（Streptavidin）結合的(dí)核心(xīn)結(jié)構。

• 與鏈黴親(qīn)和素(sù)的結(jié)合(hé)親(qīn)和(hé)力略低於(yú)生物(wù)素(sù)（解離常數(shù) $K_d\approx 10^{-11}\text{M}$），但具有“軟(ruǎn)釋放(fàng)"特性，即在(zài)溫(wēn)和條件下（如添加(jiā)遊離(lí)生物素(sù)）可被(bèi)競(jìng)爭(zhēng)性置換(huàn)，便於(yú)後(hòu)續分(fēn)離(lí)和純(chún)化(huà)。

2. 十(shí)一聚乙(yǐ)二(èr)醇(chún)鏈（PEG11）：

• 由十(shí)一個(gè)乙(yǐ)二(èr)醇(chún)單元組(zǔ)成的鏈，提(tí)供分子空間延展(zhǎn)性，降低(dī)空(kōng)間(jiān)位阻(zǔ)，提(tí)高(gāo)反(fǎn)應(yīng)效率。

• 增(zēng)加(jiā)試劑(jì)的水(shuǐ)溶性，減少(shǎo)非特異(yì)性結合，提高標(biāo)記(jì)的特異性(xìng)。

3. NHS Ester（N-羥基琥珀酰亞胺酯(zhǐ)）：

• 是(shì)一種(zhǒng)高(gāo)效的胺反應基團，能(néng)夠與含有(yǒu)伯(bó)胺(àn)（-NH₂）的分子（如蛋白(bái)質，核酸的(dí)賴氨酸殘基(jī)或氨(ān)基(jī)修飾(shì)的寡核苷(gān)酸(suān)）發(fā)生特(tè)異性反應(yīng)，形成穩(wěn)定的酰胺鍵。

• 反應(yīng)條件(jiàn)溫(wēn)和(hé)，通(tōng)常(cháng)在鹼(jiǎn)性(xìng)緩衝液（pH 7-9）中(zhōng)進(jìn)行，無需催(cuī)化劑。

二，物(wù)理(lǐ)性質

• 外(wài)觀(guān)：淡黃色(sè)油狀(zhuàng)物(wù)。

• 溶解性(xìng)：可溶(róng)於水，DMSO，DCM，DMF等(děng)溶劑(jì)，便於在(zài)各(gè)種(zhǒng)緩(huǎn)衝體係中(zhōng)使用。

• 分子量：約為646.74 g/mol。

• 穩(wěn)定(dìng)性(xìng)：

• 固體粉末在(zài)-20℃下(xià)可穩(wěn)定(dìng)保存。

• 溶(róng)解後溶(róng)液在-80℃下(xià)可長期(qī)保存(cún)，-20℃下短(duǎn)期(qī)保(bǎo)存，需(xū)避免反(fǎn)復凍(dòng)融。

• NHS酯(zhǐ)易(yì)水解，需(xū)現配(pèi)現用(yòng)。

三，反(fǎn)應(yīng)活(huó)性與應用

1. 蛋(dàn)白質(zhì)標(biāo)記(jì)：

• 通(tōng)過(guò)NHS Ester與蛋白質的(dí)伯胺(àn)基團反(fǎn)應，將脫(tuō)硫生(shēng)物(wù)素-PEG11共(gòng)價連(lián)接到(dào)目標蛋(dàn)白(bái)上，實(shí)現(xiàn)特異性(xìng)標記。

• 標記後的分子可通過(guò)鏈(liàn)黴親和素修飾(shì)的(dí)磁珠(zhū)，熒光(guāng)探針或固相載體進行捕獲(huò)，檢測或(huò)成(chéng)像(xiàng)，廣泛(fàn)應用於ELISA，Western Blot，免疫(yì)沉(chén)澱及(jí)流式細(xì)胞(bāo)術。

2. 親和純化(huà)：

• 作為親(qīn)和標簽，脫硫生(shēng)物(wù)素-PEG11標記(jì)的(dí)蛋白質可通(tōng)過鏈黴親和素(sù)親和柱(zhù)進(jìn)行純化。

• 其“軟(ruǎn)釋(shì)放"特性允(yǔn)許(xǔ)在溫和(hé)條件下洗脫目標蛋(dàn)白，減少對蛋(dàn)白活性(xìng)的影響，並避(bì)免與內(nèi)源(yuán)性生物(wù)素化分(fēn)子的共洗(xǐ)脫。

3. 生(shēng)物偶聯(lián)：

• 利用(yòng)NHS Ester的活性，可以(yǐ)將(jiāng)該化(huà)合物與(yǔ)含(hán)有氨基的生(shēng)物分(fēn)子(zǐ)（如(rú)抗(kàng)體(tǐ)，核酸(suān)等(děng)）進行偶(ǒu)聯(lián)，用於生(shēng)物標記，藥物遞送(sòng)係統(tǒng)的構(gòu)建或(huò)蛋白質的功能(néng)化修飾等(děng)領域。

• 由(yóu)於(yú)PEG11的存(cún)在，可(kě)能提(tí)供(gōng)更(gēng)好的(dí)空間(jiān)位阻和穩(wěn)定(dìng)性，減少非(fēi)特異性(xìng)結合。

4. 化(huà)學(xué)合成(chéng)：

• 在化學(xué)合成(chéng)中，該化合(hé)物可以(yǐ)作為重要的中間(jiān)體(tǐ)，用於(yú)構(gòu)建更復(fù)雜(zá)的分子結(jié)構(gòu)。例如，可以通(tōng)過與(yǔ)其他活性基(jī)團的反應，引入特定(dìng)的(dí)功(gōng)能或連(lián)接(jiē)其(qí)他(tā)分子片(piàn)段(duàn)。

四(sì)，操(cāo)作(zuò)注意事項

• 儲(chǔ)存條件：需(xū)分裝後(hòu)-20℃避光保存，避(bì)免(miǎn)反復凍(dòng)融。

• 反(fǎn)應條(tiáo)件：反應pH建議8-9，低於(yú)7時效率顯著(zhù)降低(dī)。試劑(jì)與蛋(dàn)白的(dí)摩爾比(bǐ)通(tōng)常為5-10:1，室溫(wēn)反應1-2小時或4℃過夜。

• 去(qù)除未(wèi)反(fǎn)應(yīng)試(shì)劑(jì)：通過脫鹽柱或透析去除未(wèi)反(fǎn)應的試劑。

• 競爭性洗脫(tuō)：使用鏈黴親(qīn)和(hé)素(sù)樹脂捕獲標(biāo)記蛋白後(hòu)，可加入2 mM生(shēng)物素或Desthiobiotin溶液(yè)進(jìn)行(háng)競(jìng)爭性(xìng)洗脫(tuō)。

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