1.光(guāng)譜(pǔ)法

吸(xī)收(shōu)光譜法

CY5 在 640 - 660nm 左(zuǒ)右有特征(zhēng)吸收峰。標(biāo)記牛血(xiě)清白(bái)蛋白(bái)（BSA）後，可以(yǐ)通過紫外(wài) - 可見分光(guāng)光(guāng)度(dù)計(jì)測量 CY5 - BSA 在(zài)該波(bō)長範圍內的吸收(shōu)情況。

根(gēn)據(jù)朗(lǎng)伯(bó) - 比爾(ěr)定律(lǜ)（A = εbc，其(qí)中 A 是(shì)吸(xī)光(guāng)度，ε 是摩爾吸光係數(shù)，b 是光(guāng)程長(cháng)度(dù)，c 是(shì)物質(zhì)的濃度(dù)），比(bǐ)較 CY5 - BSA 和(hé)已知濃度 CY5 標準(zhǔn)溶液的吸(xī)光度。如(rú)果(guǒ)已(yǐ)知 CY5 的(dí)摩(mó)爾吸(xī)光係(xì)數和(hé)光程長(cháng)度(dù)，就(jiù)可(kě)以(yǐ)大(dà)致計(jì)算出(chū) CY5 - BSA 中 CY5 的(dí)含量，從(cóng)而(ér)評(píng)估標記效率(shuài)。例如，假設(shè) CY5 標準溶液在(zài) 650nm 處(chǔ)的吸(xī)光度為 A1，濃(nóng)度(dù)為 c1，CY5 - BSA 在相同(tóng)波(bō)長(cháng)下吸光度(dù)為(wéi) A2，在(zài)相同(tóng)光(guāng)程下(xià)，CY5 - BSA 中 CY5 的(dí)濃度 c2 =（A2/A1）×c1。標記效率可以用(yòng)（c2 / 理(lǐ)論標(biāo)記 CY5 濃度）×100% 來(lái)表(biǎo)示。

熒光(guāng)光譜法

CY5 的熒光發(fā)射峰在 650 - 700nm 之(zhī)間。使用(yòng)熒(yíng)光(guāng)光譜儀測(cè)量(liáng) CY5 - BSA 的(dí)熒(yíng)光(guāng)強度。

同樣(yàng)通過與(yǔ)已(yǐ)知濃(nóng)度(dù) CY5 標準品的熒光(guāng)強(qiáng)度(dù)對(duì)比(bǐ)來計算(suàn)標(biāo)記(jì)效(xiào)率(shuài)。在(zài)相同的激(jī)發波長和測(cè)量條件下(xià)，假(jiǎ)設(shè)已知(zhī)濃(nóng)度(dù) CY5 標準(zhǔn)品(pǐn)的熒光強(qiáng)度為 F1，濃度(dù)為 c1，CY5 - BSA 的熒(yíng)光強(qiáng)度(dù)為 F2，CY5 - BSA 中 CY5 的(dí)濃(nóng)度(dù) c2 =（F2/F1）×c1。標(biāo)記(jì)效率(shuài)計算公(gōng)式同吸收光(guāng)譜法(fǎ)中的計(jì)算(suàn)方(fāng)式(shì)。不過(guò)需要(yào)注意的是，熒(yíng)光(guāng)強(qiáng)度可(kě)能會受到環境(jìng)因(yīn)素(sù)（如 pH，離(lí)子(zǐ)強度等）和(hé)儀器因(yīn)素(sù)（如(rú)激(jī)發光強度，探測(cè)器靈敏度等）的影響，所(suǒ)以(yǐ)測(cè)量時要(yào)保證(zhèng)測(cè)量條件(jiàn)的(dí)一致性(xìng)。

2.電(diàn)泳(yǒng)法

聚丙烯酰(xiān)胺(àn)凝膠(jiāo)電泳（SDS - PAGE）結合(hé)熒(yíng)光成像(xiàng)

將(jiāng) CY5 - BSA 和未標(biāo)記的(dí) BSA 進行(háng) SDS - PAGE 電泳。由於 CY5 的標(biāo)記，CY5 - BSA 分子量增(zēng)加，在凝(níng)膠中的(dí)遷移(yí)率會(huì)比未標(biāo)記的 BSA 慢。

通(tōng)過熒(yíng)光(guāng)成(chéng)像係統(tǒng)觀察(chá)電泳後的(dí)凝膠，分析(xī) CY5 - BSA 和未標記 BSA 條帶的(dí)強度。如(rú)果(guǒ)可以(yǐ)確定(dìng)未(wèi)標記 BSA 的(dí)量（例(lì)如(rú)通(tōng)過蛋(dàn)白(bái)定(dìng)量方(fāng)法如考(kǎo)馬斯(sī)亮藍(lán)法測(cè)定蛋(dàn)白濃(nóng)度後(hòu)上樣(yàng)相(xiāng)同(tóng)量的(dí)蛋白），並且 CY5 - BSA 條帶的(dí)熒光(guāng)強(qiáng)度(dù)能(néng)夠準確量(liáng)化（使用(yòng)合適的圖(tú)像(xiàng)分析(xī)軟(ruǎn)件），就可以(yǐ)計算(suàn)標記效率。標(biāo)記(jì)效率 =（CY5 - BSA 條(tiáo)帶(dài)熒光強(qiáng)度對(duì)應(yīng)的(dí)蛋白量 /（CY5 - BSA 條(tiáo)帶(dài)熒(yíng)光(guāng)強度對(duì)應(yīng)的蛋白量 + 未標記(jì) BSA 條帶蛋(dàn)白(bái)量(liáng)））×100%。這種(zhǒng)方法相(xiāng)對(duì)直觀(guān)，但(dàn)對成(chéng)像(xiàng)設(shè)備和圖(tú)像分析(xī)的準確(què)性要求較高(gāo)。

3.色(sè)譜法

高效液相色譜(pǔ)（HPLC）或尺寸排(pái)阻(zǔ)色(sè)譜（SEC）

通(tōng)過 HPLC 或(huò) SEC 分離(lí) CY5 - BSA 和(hé)未標(biāo)記(jì)的 BSA 以(yǐ)及(jí)未反應(yīng)的 CY5。在(zài)合(hé)適(shì)的(dí)色(sè)譜條件下，它(tā)們會(huì)在不(bù)同時間出(chū)峰。

對於 SEC，根(gēn)據分子大小進行(háng)分(fēn)離(lí)，CY5 - BSA 由於分子較大(dà)，出峰時間會早於(yú)未(wèi)反應(yīng)的 CY5。通過(guò)積(jī)分(fēn)峰(fēng)麵(miàn)積，可以(yǐ)計(jì)算(suàn)出 CY5 - BSA 的含(hán)量(liáng)。假設(shè)總峰(fēng)麵積（CY5 - BSA 峰麵(miàn)積(jī) + 未(wèi)反應(yīng) CY5 峰(fēng)麵(miàn)積(jī)）為 A 總(zǒng)，CY5 - BSA 峰麵(miàn)積為 A 標，標記效率 =（A 標(biāo) / A 總）×100%。HPLC 可以(yǐ)根據(jù)不同(tóng)的分離機(jī)製（如反(fǎn)相色(sè)譜(pǔ)等）進行(háng)更精(jīng)細的(dí)分離，計(jì)算標(biāo)記效率的原(yuán)理(lǐ)類(lèi)似，但(dàn)需要對色譜峰進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定(dìng)和(hé)積分。

4.放(fàng)射性(xìng)同(tóng)位(wèi)素(sù)標記結(jié)合法（如果(guǒ) CY5 或 BSA 可(kě)以(yǐ)進行放射性同位素(sù)標(biāo)記(jì)）

例如(rú)，先將 CY5 或(huò) BSA 中的一(yī)種(zhǒng)用(yòng)放(fàng)射性同(tóng)位素（如(rú) ³H，¹⁴C 等(děng)）標(biāo)記，然(rán)後進(jìn)行(háng)標記反應。

反應完成(chéng)後(hòu)，通(tōng)過(guò)放(fàng)射性測量儀分別測(cè)量(liáng) CY5 - BSA 產(chǎn)物(wù)和未反應的標(biāo)記(jì)原料的放(fàng)射(shè)性強度(dù)。假設(shè) CY5 - BSA 產(chǎn)物的(dí)放射性(xìng)強(qiáng)度(dù)為(wéi) I1，未反(fǎn)應(yīng)的(dí)標記原(yuán)料(liào)放(fàng)射(shè)性強度為 I2，標記效(xiào)率(shuài) =（I1/（I1 + I2））×100%。這種方(fāng)法(fǎ)比較準確(què)，但涉及放(fàng)射性物質，操(cāo)作(zuò)需要嚴格(gé)遵(zūn)守(shǒu)相(xiāng)關安全規定(dìng)。

關於我們(mén):

陝西(xī)星貝愛科生物(wù)科(kē)技(jì)經(jīng)營的(dí)產品種(zhǒng)類包括有(yǒu)：合(hé)成磷脂(zhī)，高(gāo)分(fēn)子(zǐ)聚乙二(èr)醇衍生(shēng)物，嵌段(duàn)共聚物(wù)，磁(cí)性納米顆(kē)粒(lì)，納(nà)米金及(jí)納(nà)米金(jīn)棒，近(jìn)紅外(wài)熒光(guāng)染(rǎn)料，活(huó)性(xìng)熒光(guāng)染料(liào)，熒光(guāng)標記(jì)物，蛋白交聯劑(jì)，小(xiǎo)分(fēn)子PEG衍(yǎn)生物(wù)，點擊(jī)化學(xué)產品，樹(shù)枝(zhī)狀聚(jù)合(hé)物，環糊精衍(yǎn)生物，大(dà)環配體(tǐ)類(lèi)，熒(yíng)光量子點，透明質(zhì)酸(suān)衍生(shēng)物，石(shí)墨(mò)烯或氧(yǎng)化石墨烯，碳納米管(guǎn)，富勒烯，二氧(yǎng)化矽及介(jiè)孔(kǒng)二氧化(huà)矽，聚(jù)合物(wù)微球(qiú)，近紅(hóng)外(wài)熒光(guāng)染料(liào)，聚苯乙(yǐ)烯(xī)微(wēi)球(qiú)，上(shàng)轉換(huàn)納(nà)米發光(guāng)顆粒，MRI核磁造影產品，熒(yíng)光(guāng)蛋白及熒光探(tàn)針等(děng)等。

溫(wēn)馨提示(shì)：供應產品僅(jǐn)用(yòng)於(yú)科研(yán)，不(bù)能(néng)用(yòng)於(yú)人(rén)體！

相(xiāng)關產品(pǐn)：

CY3-氯化血紅(hóng)素(sù),CY3-Hemin

Fitc-正戊(wù)酸，FITC-Valeric acid

CY2-淫羊藿(huò)次苷I,CY2-IcarisideI

CY2-甲硝(xiāo)唑,CY2-Metronidazole

CY2-果(guǒ)糖,CY2-Fructose

CY5-對(duì)羥(qiǎng)基(jī)苯甲醛

CY5-黃(huáng)芪(qí)多(duō)糖

Cy5-豬去氧膽酸(suān),CY5-Pigdeoxybileacid

CY2-膽酸(suān),CY2-Cholicacid

CY5-花生(shēng)四(sì)烯酸，CY5-Arachidonicacid

CY5-二(èr)十(shí)二碳六烯酸(suān),CY5-DHA

CY5-二(èr)十(shí)碳(tàn)五(wǔ)烯酸,CY5-EPA