1.利用(yòng)中間載體(tǐ)分子

間接(jiē)標記法(fǎ)通常(cháng)是(shì)借助一種(zhǒng)中(zhōng)間載體(tǐ)分(fēn)子(zǐ)來連(lián)接(jiē) FITC 和轉鐵(tiě)蛋白。這(zhè)個中(zhōng)間(jiān)載體一般是具有(yǒu)雙(shuāng)功能基(jī)團的(dí)化(huà)合物，例如含有一(yī)個可(kě)以(yǐ)與 FITC 反應(yīng)的基團和(hé)另一(yī)個(gè)可以(yǐ)與轉(zhuǎn)鐵蛋白反應的(dí)基團。

常見的(dí)中間(jiān)載體(tǐ)分子(zǐ)上(shàng)的反應(yīng)基團(tuán)包括(kuò)氨基，羧基，巰基(jī)等。這(zhè)些(xiē)基團可以通過(guò)化學(xué)反應分(fēn)別(bié)與(yǔ) FITC 和(hé)轉(zhuǎn)鐵蛋白(bái)上的相(xiāng)應活性基(jī)團結(jié)合。例(lì)如，中間載體分子(zǐ)上的(dí)氨基(jī)可(kě)以(yǐ)與 FITC 的異(yì)硫(liú)氰酸酯基(jī)團(tuán)反(fǎn)應(yīng)，而(ér)其羧基(jī)可以與(yǔ)轉鐵蛋(dàn)白上的氨基通(tōng)過(guò)形(xíng)成酰胺(àn)鍵(jiàn)相(xiāng)連(lián)。

2.分步反(fǎn)應(yīng)過程(chéng)

第(dì)一步：FITC 與中間載(zǎi)體結合

首先將(jiāng) FITC 與(yǔ)中間載(zǎi)體在適當的反應條(tiáo)件下進行反(fǎn)應。反(fǎn)應條(tiáo)件根據中(zhōng)間載(zǎi)體和(hé) FITC 的(dí)化(huà)學(xué)性(xìng)質(zhì)而(ér)定(dìng)，一般(bān)需(xū)要在(zài)合(hé)適(shì)的緩衝液中(zhōng)進行。例如(rú)，如果中(zhōng)間(jiān)載(zǎi)體上(shàng)的反(fǎn)應(yīng)基(jī)團是(shì)氨基(jī)，在鹼性緩衝(chōng)液（如(rú)碳酸(suān)鹽 - 碳酸氫鹽緩衝液，pH 9 - 9.5）中(zhōng)，氨基與(yǔ) FITC 的異(yì)硫氰酸酯(zhǐ)基團反(fǎn)應(yīng)，形成一個(gè)帶有能(néng)夠(gòu)與轉(zhuǎn)鐵(tiě)蛋白(bái)反應的基團的(dí) FITC - 中(zhōng)間載(zǎi)體(tǐ)復(fù)合(hé)物。

第(dì)二(èr)步(bù)：FITC - 中(zhōng)間(jiān)載(zǎi)體(tǐ)復(fù)合物(wù)與轉鐵(tiě)蛋(dàn)白(bái)結(jié)合

然(rán)後(hòu)將 FITC - 中間載體復合物與轉(zhuǎn)鐵(tiě)蛋白(bái)在(zài)另一種合適(shì)的(dí)反應條(tiáo)件(jiàn)下結合。這個(gè)反(fǎn)應可(kě)能需要在(zài)中(zhōng)性(xìng)或弱(ruò)酸性的緩(huǎn)衝液(yè)中進(jìn)行，以利於中(zhōng)間(jiān)載體(tǐ)上剩餘的(dí)活性(xìng)基團(tuán)與轉鐵(tiě)蛋白(bái)反應。例(lì)如(rú)，中間(jiān)載(zǎi)體上的羧(suō)基(jī)與轉(zhuǎn)鐵蛋(dàn)白上的氨基(jī)在(zài)含有(yǒu)縮合劑（如(rú)碳(tàn)化(huà)二亞胺(àn)）的磷(lín)酸(suān)鹽緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)（pH 7 - 7.4）中反應，從而(ér)將(jiāng) FITC 通(tōng)過(guò)中間(jiān)載體連接到(dào)轉鐵蛋(dàn)白上。

3.提高(gāo)標記(jì)的(dí)特(tè)異性(xìng)和(hé)可(kě)控性

通過(guò)使(shǐ)用(yòng)中間(jiān)載體，間(jiān)接(jiē)標(biāo)記(jì)法可以(yǐ)在(zài)一定(dìng)程度(dù)上(shàng)提高標(biāo)記的特(tè)異性。因(yīn)為可(kě)以(yǐ)選(xuǎn)擇(zé)對 FITC 和轉(zhuǎn)鐵蛋(dàn)白上特(tè)定基團有選擇(zé)性(xìng)反(fǎn)應的中(zhōng)間(jiān)載體，減少(shǎo)非特(tè)異(yì)性結(jié)合。

同(tóng)時，這種(zhǒng)方法還能更好地(dì)控製標記的(dí)位置和程度(dù)。例如，通過調整(zhěng)中間載體的(dí)結構(gòu)和反應條件(jiàn)，可(kě)以(yǐ)使(shǐ) FITC 連接到轉鐵蛋白的特(tè)定(dìng)區(qū)域，或(huò)者控製每個(gè)轉(zhuǎn)鐵蛋白分(fēn)子上連接的 FITC 分子(zǐ)數量(liáng)，從(cóng)而(ér)滿足(zú)不(bù)同實驗(yàn)目的的(dí)要(yào)求(qiú)，如在(zài)需要精確(què)控(kòng)製(zhì)標記密(mì)度以研究細胞(bāo)攝(shè)取與熒光(guāng)強(qiáng)度(dù)關係的實(shí)驗(yàn)中，間接(jiē)標記(jì)法就(jiù)具(jù)有(yǒu)優勢(shì)。

關(guān)於我(wǒ)們(mén):

陝(shǎn)西(xī)星(xīng)貝愛科(kē)生(shēng)物科技經(jīng)營的產(chǎn)品(pǐn)種類(lèi)包括有：合成磷脂(zhī)，高分子(zǐ)聚乙二(èr)醇衍(yǎn)生物(wù)，嵌(qiàn)段共聚物，磁性(xìng)納米顆粒，納米金(jīn)及(jí)納米金棒(bàng)，近紅(hóng)外(wài)熒光染(rǎn)料(liào)，活性(xìng)熒光(guāng)染料，熒(yíng)光標記(jì)物，蛋(dàn)白交聯劑，小分子PEG衍生(shēng)物(wù)，點擊(jī)化學(xué)產(chǎn)品，樹枝(zhī)狀聚合物，環糊(hū)精(jīng)衍生物，大(dà)環配(pèi)體類，熒(yíng)光(guāng)量子點(diǎn)，透(tòu)明質(zhì)酸(suān)衍(yǎn)生物，石墨烯或(huò)氧(yǎng)化(huà)石(shí)墨烯，碳(tàn)納米管，富(fù)勒烯(xī)，二氧化矽及(jí)介孔(kǒng)二(èr)氧(yǎng)化矽，聚(jù)合(hé)物微球(qiú)，近(jìn)紅(hóng)外(wài)熒(yíng)光染料，聚苯(běn)乙(yǐ)烯微(wēi)球，上轉(zhuǎn)換納(nà)米發(fā)光顆(kē)粒，MRI核磁(cí)造(zào)影產品，熒光(guāng)蛋(dàn)白及熒光(guāng)探(tàn)針等(děng)等。

溫馨提示(shì)：供(gōng)應產(chǎn)品(pǐn)僅用於(yú)科研，不(bù)能用(yòng)於人體！

相(xiāng)關產(chǎn)品(pǐn)：

CY5-L-精氨(ān)酸,CY5-L(+)-Arginine

Cy3-Chitosan,CY3-殼(ké)聚糖

FITC-豬(zhū)胰島(dǎo)素,FITC-Porcine Insulin

FITC-胱(guāng)氨酸(suān),FITC-cystine

FITC-精氨酸，FITC-L(+)-Arginine

FITC-牛(niú)磺(huáng)酸,FITC-Taurine

FITC-絲氨酸,FITC-L-Serine

FITC-煙(yān)酸,FITC-Nicotinic acid

CY3-氯化血紅素,CY3-Hemin