試劑和(hé)材料準備(bèi)

• FITC：選擇品(pǐn)質良好，純度較高的異硫氰(qíng)酸熒光(guāng)素，一(yī)般(bān)可使用無水(shuǐ)二甲(jiǎ)基(jī)亞(yà)碸（DMSO）將其溶(róng)解配製(zhì)成(chéng) 1mg/ml 的溶液(yè)，且需(xū)現用(yòng)現配，因為 FITC 在儲存(cún)過程中(zhōng)可(kě)能會(huì)分解失效(xiào).

• 乳糖(táng)：將乳(rǔ)糖(táng)溶解在(zài)適當(dāng)的緩(huǎn)衝液中，如(rú) 0.1M，pH 9.0 的(dí)碳酸鈉(nà)緩衝液(yè)，配製成一定濃(nóng)度(dù)的溶液，濃(nóng)度(dù)可根據具體實(shí)驗需求進行(háng)調(tiáo)整，但(dàn)一般不(bù)宜(yí)過低，以(yǐ)保證(zhèng)有足(zú)夠的(dí)乳糖參(cān)與反(fǎn)應.

標記反應(yīng)

• 混(hùn)合(hé)溶(róng)液：在(zài)避(bì)光條(tiáo)件下(xià)，將 FITC 溶(róng)液緩慢地(dì)逐滴加(jiā)入到(dào)乳(rǔ)糖溶液中，邊(biān)加(jiā)邊輕(qīng)輕(qīng)攪(jiǎo)拌(bàn)，使二者(zhě)充分(fēn)混(hùn)合(hé)均(jūn)匀(yún) 。一般每毫(háo)升乳(rǔ)糖溶(róng)液中(zhōng)可加入 50μl 的 FITC 溶液(yè)，但具體(tǐ)用量(liáng)也可根據(jù)實驗優化的(dí)結果進(jìn)行調整.

• 反(fǎn)應條件：將(jiāng)混合(hé)後的(dí)溶液置(zhì)於 4℃的(dí)黑暗環境(jìng)中孵(fū)育反應(yīng)，反應時間通常(cháng)為 8 小(xiǎo)時左右(yòu)，但為了確(què)定最(zuì)佳反(fǎn)應(yīng)時間，可(kě)設置(zhì)不同的時間(jiān)梯(tī)度(dù)進(jìn)行(háng)預實驗(yàn)，如(rú) 4 小(xiǎo)時，6 小時，8 小時，10 小(xiǎo)時等(děng)，以找到標(biāo)記(jì)效(xiào)率(shuài)較(jiào)高的反應(yīng)時(shí)間.

反(fǎn)應終(zhōng)止與純化

• 終(zhōng)止(zhǐ)反應：向反應體係(xì)中加入適(shì)量的(dí)氯化銨，使其(qí)終(zhōng)濃度達(dá)到 50mM，以(yǐ)終止 FITC 與乳糖(táng)的反應(yīng)，然(rán)後(hòu)在(zài) 4℃下(xià)繼續孵育(yù) 2 小時(shí).

• 去除(chú)雜質：反應終止後(hòu)，可采(cǎi)用透(tòu)析法或凝(níng)膠過(guò)濾色(sè)譜法等對標記產物進行純化(huà)，以去除(chú)未反(fǎn)應(yīng)的 FITC，乳(rǔ)糖以(yǐ)及(jí)其(qí)他(tā)雜質。透(tòu)析(xī)時(shí)可(kě)選(xuǎn)擇合(hé)適(shì)截(jié)留(liú)分子量(liáng)的透(tòu)析袋，在適(shì)當的(dí)緩衝(chōng)液(yè)中(zhōng)進行透(tòu)析(xī)；凝膠(jiāo)過濾色譜(pǔ)則可(kě)根(gēn)據分子大小的差異將標記(jì)產(chǎn)物與(yǔ)雜質分離(lí)開來(lái).

產物鑒定與檢(jiǎn)測(cè)

• 熒光檢(jiǎn)測(cè)：使用熒光(guāng)光譜(pǔ)儀對純化後(hòu)的 FITC - 乳(rǔ)糖(táng)產物進(jìn)行(háng)熒光檢測，激(jī)發波長一般為(wéi) 490 - 495nm，發射波(bō)長(cháng)為 515 - 525nm，觀(guān)察其熒(yíng)光強(qiáng)度和(hé)光(guāng)譜(pǔ)特(tè)征(zhēng)是否(fǒu)符(fú)合(hé)預(yù)期(qī)，以(yǐ)確(què)定標記是否成功以及標記效(xiào)率的高低.

• 其(qí)他(tā)檢(jiǎn)測：還可(kě)結(jié)合(hé)其他(tā)分析(xī)方法，如(rú)高(gāo)效液相色譜（HPLC），質(zhì)譜(pǔ)（MS）等對標記(jì)產(chǎn)物的純(chún)度(dù)，結(jié)構(gòu)等進行(háng)進(jìn)一步(bù)的鑒(jiàn)定和分析，以確保獲得高(gāo)質(zhì)量的 FITC - 乳(rǔ)糖標(biāo)記產(chǎn)物.

關於我們:

陝西星(xīng)貝愛(ài)科(kē)生物科技經(jīng)營(yíng)的產(chǎn)品種類(lèi)包括(kuò)有：合成磷脂，高分(fēn)子聚乙(yǐ)二醇(chún)衍生物，嵌段共聚物(wù)，磁性納米顆粒，納米金及納米金棒(bàng)，近紅外熒光(guāng)染料(liào)，活性熒(yíng)光染料，熒光(guāng)標(biāo)記(jì)物，蛋白交(jiāo)聯劑(jì)，小(xiǎo)分子PEG衍生物，點(diǎn)擊(jī)化學產(chǎn)品，樹枝狀(zhuàng)聚合物，環糊(hū)精(jīng)衍生(shēng)物，大(dà)環配(pèi)體類(lèi)，熒(yíng)光量(liáng)子(zǐ)點(diǎn)，透(tòu)明質酸衍生(shēng)物(wù)，石墨(mò)烯或氧(yǎng)化石墨(mò)烯，碳納米管，富勒(lè)烯，二氧化矽及(jí)介孔二氧(yǎng)化(huà)矽，聚合物微球(qiú)，近(jìn)紅外熒光(guāng)染料(liào)，聚苯(běn)乙烯(xī)微球(qiú)，上(shàng)轉換納米發(fā)光(guāng)顆粒，MRI核(hé)磁造影產品，熒(yíng)光(guāng)蛋(dàn)白及(jí)熒光探針(zhēn)等(děng)等。

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