試(shì)劑和材料準備(bèi)

• 血紅(hóng)蛋白溶(róng)液：可以從血液(yè)中分(fēn)離(lí)提(tí)取血紅(hóng)蛋(dàn)白(bái)，也可購買商(shāng)品(pǐn)化(huà)的(dí)血(xiě)紅(hóng)蛋(dàn)白產品(pǐn)，用合適(shì)的緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)將(jiāng)其溶(róng)解並(bìng)調(tiáo)整(zhěng)至(zhì)合適(shì)的濃度，一(yī)般(bān)濃度不(bù)小於 0.5mg/mL。

• 熒光素：如異硫(liú)氰酸(suān)熒光素（FITC），使用無(wú)水(shuǐ) DMSO 配(pèi)製 10mM 的(dí)染料溶液(yè)，剩(shèng)餘(yú)染料(liào)溶(róng)液(yè)可(kě)在(zài) - 20℃分裝保存 1 個月(yuè)。如果是(shì)水(shuǐ)溶(róng)解，染(rǎn)料有易(yì)被水(shuǐ)解的性(xìng)質，建議現配現(xiàn)用。

• 緩(huǎn)衝液(yè)：如(rú) pH 8-9 的(dí)碳酸(suān)鹽緩(huǎn)衝(chōng)液或(huò) pH 8.2 的磷酸鹽緩衝(chōng)液。

標記(jì)反應(yīng)

• 取一(yī)定(dìng)量的(dí)血(xiě)紅(hóng)蛋(dàn)白溶液(yè)置(zhì)於合(hé)適(shì)的(dí)容(róng)器(qì)中(zhōng)，如(rú)比(bǐ)色管(guǎn)或離心(xīn)管。

• 加入適(shì)量(liáng)的(dí)緩衝液，使(shǐ)反應(yīng)體(tǐ)係處(chǔ)於適宜(yí)的(dí) pH 和離子強度環(huán)境。

• 按(àn)照(zhào)一(yī)定的摩(mó)爾比(bǐ)緩(huǎn)慢(màn)滴加熒光(guāng)素(sù)溶液(yè)，染料與蛋(dàn)白的(dí)摩爾(ěr)比(bǐ)通(tōng)常在 5:1-20:1，邊(biān)滴加(jiā)邊攪拌或(huò)輕輕振(zhèn)蕩，使(shǐ)反應充分混合。

• 將反應(yīng)容(róng)器置(zhì)於一(yī)定的溫度條(tiáo)件(jiàn)下(xià)孵(fū)育，如(rú) 4℃反應(yīng) 12 小時或室(shì)溫下反(fǎn)應 2 小時等。

純化(huà)與分(fēn)離(lí)

• 反應結束(shù)後，需(xū)要通過透(tòu)析(xī)或(huò)者凝膠(jiāo)過(guò)濾等方法(fǎ)除去未反應(yīng)的熒光(guāng)素(sù)。透(tòu)析(xī)時(shí)，將反(fǎn)應(yīng)後的(dí)溶液(yè)裝入透(tòu)析袋(dài)中，在(zài)大量的緩衝液(yè)中透(tòu)析數小時(shí)至過夜，期(qī)間(jiān)更換(huàn)緩(huǎn)衝液數次(cì)，以去除(chú)未(wèi)結合(hé)的(dí)熒光(guāng)素。凝(níng)膠過濾可以使(shǐ)用葡(pú)聚糖凝膠(jiāo)等填料，將反(fǎn)應混合物(wù)上(shàng)樣(yàng)到凝膠(jiāo)柱(zhù)上(shàng)，用(yòng)緩衝液(yè)洗(xǐ)脫(tuō)，收集標記(jì)的血紅(hóng)蛋白(bái)峰(fēng)。

檢測(cè)與(yǔ)鑒定

• 熒(yíng)光顯微鏡觀(guān)察(chá)：取(qǔ)少(shǎo)量(liáng)標記(jì)後(hòu)的血(xiě)紅蛋(dàn)白溶(róng)液，滴(dī)在(zài)載(zǎi)玻片上，蓋(gài)上(shàng)蓋(gài)玻片(piàn)，在熒光(guāng)顯微(wēi)鏡下觀(guān)察(chá)，選(xuǎn)擇(zé)與(yǔ)熒光(guāng)素激(jī)發和發射波(bō)長(cháng)匹配的(dí)濾光(guāng)片，看是否有(yǒu)明顯的熒(yíng)光(guāng)信號(hào)，並且觀(guān)察熒光(guāng)的(dí)分(fēn)布情(qíng)況，判斷(duàn)標記是(shì)否成(chéng)功。

• 蛋白電泳(yǒng)實驗(yàn)：進行蛋(dàn)白(bái)電泳，標記後蛋白本(běn)身(shēn)分子量(liáng)會(huì)增大，若蛋(dàn)白(bái)存(cún)在微小(xiǎo)向上(shàng)拖帶(dài)可(kě)以(yǐ)證明標(biāo)記成功。如果(guǒ)向(xiàng)下(xià)大範圍(wéi)拖帶可(kě)能(néng)是蛋(dàn)白發(fā)生降(jiàng)解。

• 分光(guāng)光(guāng)度(dù)計測(cè)定(dìng)：使用分光(guāng)光(guāng)度計測(cè)定熒(yíng)光素和血(xiě)紅蛋(dàn)白(bái)的比(bǐ)值（F/P），F/P 的比值反映熒(yíng)光(guāng)蛋白的(dí)特異性染(rǎn)色質(zhì)量，一般要(yào)求 F/P 的(dí)克(kè)分子比值(zhí)為 1～3。過高(gāo)時，非(fēi)特異(yì)性(xìng)染色增(zēng)強；過低時，熒光很弱(ruò)，標記(jì)效率低。

關(guān)於我(wǒ)們:

陝(shǎn)西星(xīng)貝愛(ài)科生物(wù)科技經(jīng)營(yíng)的(dí)產(chǎn)品種類(lèi)包(bāo)括(kuò)有：合成磷脂
，高分(fēn)子(zǐ)聚(jù)乙(yǐ)二醇衍(yǎn)生(shēng)物
，嵌(qiàn)段共聚物(wù)
，磁性納(nà)米顆粒
，納米金(jīn)及納米金棒(bàng)
，近紅(hóng)外熒光染料(liào)
，活性熒(yíng)光染(rǎn)料
，熒光標(biāo)記(jì)物
，蛋白(bái)交聯(lián)劑
，小分(fēn)子PEG衍生(shēng)物
，點擊化(huà)學產(chǎn)品(pǐn)
，樹枝狀聚(jù)合(hé)物
，環糊(hū)精衍生物(wù)
，大環(huán)配體類
，熒光(guāng)量子(zǐ)點(diǎn)
，透明質酸衍生物
，石墨(mò)烯(xī)或氧化石墨(mò)烯(xī)
，碳納米(mǐ)管
，富(fù)勒烯(xī)，二氧(yǎng)化(huà)矽及(jí)介(jiè)孔二(èr)氧化(huà)矽，聚合物(wù)微(wēi)球(qiú)，近紅外(wài)熒(yíng)光染(rǎn)料，聚苯乙烯微(wēi)球(qiú)，上轉換納米(mǐ)發光(guāng)顆(kē)粒(lì)，MRI核(hé)磁(cí)造影產品，熒光(guāng)蛋白及熒(yíng)光探(tàn)針等(děng)等。

溫(wēn)馨提示：供(gōng)應產品(pǐn)僅用於科(kē)研(yán)，不能用於人體！

相關產(chǎn)品：

RhB-Binimetinib

Fitc-多巴胺,FITC-Dopamine

Fitc-β-穀(gǔ)甾醇,FITC-β-Sitosterol

FITC-Insulin 綠色熒光素標記胰島(dǎo)素

TPP-DOX,阿(ā)黴素(sù)-三(sān)苯基(jī)膦

TPP-SH巰基化三(sān)苯基膦

FITC-丁(dīng)二酸 FTIC-Succinic acid

CY3-多巴(bā)胺,CY3--Dopamine