1.物理混(hùn)合法

• 原理
  ：

• 基於 DOPE 和 ICG 之間的物理相互作用，如疏(shū)水相互(hù)作(zuò)用。DOPE 的疏(shū)水(shuǐ)部分(fēn)（脂肪酸(suān)鏈(liàn)）能夠(gòu)與(yǔ) ICG 分子的(dí)疏水區(qū)域(yù)相互吸(xī)引(yǐn)，從(cóng)而將(jiāng) ICG 包(bāo)裹在 DOPE 形(xíng)成(chéng)的結構中，形成 DOPE - ICG 復合(hé)物(wù)。

步驟
：

• 溶解 DOPE
  ：將 DOPE 溶解在(zài)合(hé)適的有機溶(róng)劑(jì)中，常(cháng)用(yòng)的有機溶劑(jì)有氯仿或(huò)二(èr)氯甲烷。例如，在(zài)通風(fēng)良(liáng)好(hǎo)的(dí)通風(fēng)櫥中，將(jiāng)適(shì)量的 DOPE（如(rú) 10 - 100mg）加入到(dào)裝(zhuāng)有(yǒu) 1 - 10mL 氯仿的(dí)玻璃(lí)容器中，使(shǐ)用(yòng)磁力(lì)攪拌器(qì)攪(jiǎo)拌(bàn)，直(zhí)至 DOPE 全(quán)溶(róng)解(jiě)，得到(dào)澄清的 DOPE 溶(róng)液。

• 溶(róng)解(jiě) ICG
  ：同時，將(jiāng) ICG 溶(róng)解在(zài)適當(dāng)的溶劑中(zhōng)。由(yóu)於 ICG 在(zài)水(shuǐ)中溶解(jiě)度(dù)較低，通(tōng)常(cháng)選擇(zé)二甲(jiǎ)基亞碸(fēng)（DMSO）或 N,N - 二甲(jiǎ)基甲(jiǎ)酰(xiān)胺（DMF）作為溶(róng)劑(jì)。例如，將一(yī)定(dìng)量的(dí) ICG（如(rú) 1 - 10mg）加入到(dào) 0.1 - 1mL 的 DMSO 中，超聲處理(lǐ)數分鐘(zhōng)，使其全(quán)溶(róng)解，形成 ICG 溶液。

• 混(hùn)合溶液(yè)
  ：在(zài)溫(wēn)和攪拌的(dí)條(tiáo)件(jiàn)下，將 ICG 溶液緩慢(màn)滴加到 DOPE 溶液(yè)中(zhōng)。滴(dī)加(jiā)過程要緩慢，以確保(bǎo) ICG 能夠均(jūn)匀地(dì)分散在 DOPE 溶液(yè)中(zhōng)。例(lì)如，使(shǐ)用滴(dī)管逐滴(dī)加(jiā)入 ICG 溶液，同(tóng)時保持(chí)攪拌(bàn)速(sù)度在 100 - 500rpm 左右。

• 去(qù)除(chú)溶(róng)劑
  ：將(jiāng)混(hùn)合溶(róng)液轉移到(dào)旋轉蒸發(fā)儀中(zhōng)，在適(shì)當的溫度（如 30 - 50℃）和(hé)真(zhēn)空條件(jiàn)下旋(xuán)轉(zhuǎn)蒸發(fā)，去除有機溶(róng)劑。隨著溶(róng)劑(jì)的蒸(zhēng)發(fā)，DOPE 和(hé) ICG 會(huì)逐(zhú)漸(jiàn)聚(jù)集形(xíng)成復合物。當(dāng)溶劑(jì)基本去除(chú)後，可(kě)得到含(hán)有 DOPE - ICG 復合(hé)物(wù)的固體或半固體(tǐ)物質。

• 水化復合(hé)物
  ：為了(liǎo)得(dé)到適合生(shēng)物應用的(dí) DOPE - ICG 製(zhì)劑，需(xū)要(yào)對上(shàng)述固體(tǐ)或半固體(tǐ)物(wù)質進(jìn)行(háng)水化。加(jiā)入(rù)適(shì)量的(dí)緩衝(chōng)液（如磷酸(suān)鹽(yán)緩衝液(yè)，pH 7.2 - 7.4），緩衝(chōng)液的體積可根(gēn)據(jù)所需復合(hé)物的濃度來確定，一般(bān)為 1 - 10mL。然(rán)後(hòu)通過超聲處理或溫和攪(jiǎo)拌(bàn)，使 DOPE - ICG 復合物均(jūn)匀地分散在緩(huǎn)衝液(yè)中(zhōng)，形成穩定的(dí)膠體溶(róng)液(yè)。

2.化學偶(ǒu)聯法

• 原理
  ：

• 利用(yòng) DOPE 和(hé) ICG 上(shàng)的活性官能團進行(háng)化(huà)學反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)偶聯。例如，如果 ICG 分(fēn)子(zǐ)含有羧基（-COOH），DOPE 分(fēn)子(zǐ)含有氨基（-NH₂），可以通(tōng)過偶聯試劑(jì)（如(rú) 1 - 乙基 - 3 - (3 - 二(èr)甲基氨基(jī)丙(bǐng)基(jī)) 碳二亞(yà)胺（EDC）和(hé) N - 羥基琥(hǔ)珀酰(xiān)亞(yà)胺(àn)（NHS））來促(cù)進(jìn)酰胺鍵（-CONH -）的(dí)形成，從而(ér)將 ICG 和 DOPE 化(huà)學(xué)偶聯(lián)在一起(qǐ)。

3.步驟(zhòu)
：

• 修(xiū)飾反(fǎn)應物（如果(guǒ)需要）
  ：首先檢(jiǎn)查 DOPE 和 ICG 的化(huà)學(xué)結(jié)構(gòu)，確定合適的(dí)反應(yīng)基(jī)團(tuán)。如果反應基團(tuán)需要活(huó)化(huà)或修飾，要提(tí)前進(jìn)行(háng)相(xiāng)應的化(huà)學處(chǔ)理。例如(rú)，對(duì)於(yú)含有(yǒu)羧基(jī)的(dí) ICG，可以通過(guò)與(yǔ) NHS 反(fǎn)應生成(chéng)活性酯(zhǐ)，使其更容(róng)易與(yǔ)氨(ān)基反(fǎn)應。

• 溶解反應物(wù)
  ：將 DOPE 和(hé) ICG 分別(bié)溶(róng)解(jiě)在(zài)合(hé)適的(dí)反(fǎn)應溶(róng)劑中。常(cháng)用的反(fǎn)應溶(róng)劑(jì)為緩衝液(yè)，如(rú) MES 緩(huǎn)衝(chōng)液（pH 5.5 - 6.5）或磷(lín)酸鹽緩(huǎn)衝液（pH 7.0 - 7.4），以提供合適的反應環(huán)境。例(lì)如，將(jiāng) DOPE 和(hé) ICG 分(fēn)別溶(róng)解(jiě)在(zài)不同的緩衝液(yè)中(zhōng)，濃度可根據(jù)反應的(dí)化學計(jì)量比來確定，一(yī)般(bān)為 0.1 - 10mM。

• 添(tiān)加(jiā)偶聯(lián)試(shì)劑(jì)
  ：在攪(jiǎo)拌(bàn)的(dí)條件下，向反(fǎn)應體係中依次加入偶(ǒu)聯試劑 EDC 和 NHS。EDC 和 NHS 的用量要根據(jù) ICG 和(hé) DOPE 上(shàng)反(fǎn)應基團(tuán)的(dí)摩(mó)爾數來確(què)定(dìng)，一般 EDC 過量(liáng) 1.2 - 1.5 倍，NHS 過(guò)量 1 - 1.2 倍(bèi)。例如(rú)，若 ICG 的羧基摩爾(ěr)數(shù)為(wéi) 1mmol，可加(jiā)入 1.2 - 1.5mmol 的 EDC 和(hé) 1 - 1.2mmol 的(dí) NHS。

• 進行反應(yīng)
  ：將(jiāng)反應(yīng)體係(xì)在(zài)適當的溫(wēn)度(dù)（如室(shì)溫(wēn)或(huò) 4 - 10℃）下反(fǎn)應數小(xiǎo)時(shí)至(zhì)過夜(yè)。反應過程(chéng)中可以(yǐ)通過(guò)薄(báo)層(céng)色譜(pǔ)（TLC）或高(gāo)效(xiào)液相(xiāng)色譜(pǔ)（HPLC）來(lái)監測反應(yīng)進程。例如，對(duì)於反應較(jiào)慢(màn)的(dí)體係，可以(yǐ)在(zài)室(shì)溫下反應 24 - 48 小(xiǎo)時(shí)，期間每隔(gé)一段時間(jiān)取樣(yàng)進(jìn)行 TLC 或(huò) HPLC 分析，觀察(chá)反應(yīng)物(wù)和(hé)產物(wù)的變(biàn)化(huà)。

• 產(chǎn)物(wù)純(chún)化
  ：反(fǎn)應(yīng)結束後，需(xū)要對(duì)產(chǎn)物(wù)進行(háng)純化，以去(qù)除未(wèi)反應(yīng)的(dí)反(fǎn)應物(wù)
  ，偶聯試(shì)劑(jì)和副產物(wù)。常(cháng)用的純化方(fāng)法有柱(zhù)層(céng)析(xī)
  ，透(tòu)析和超濾等。例如(rú)，采用柱(zhù)層析(xī)法，選(xuǎn)擇合適(shì)的固定(dìng)相（如(rú)矽膠柱）和(hé)流動(dòng)相(xiāng)（如不(bù)同比例的(dí)有(yǒu)機溶劑和緩(huǎn)衝(chōng)液混合液(yè)），根據(jù)產物(wù)和雜質的極性(xìng)差異進(jìn)行(háng)分離，得(dé)到(dào)純淨的 DOPE - ICG 偶聯物。

關於我們:

陝(shǎn)西(xī)星(xīng)貝(bèi)愛科生物(wù)科技經(jīng)營(yíng)的產品(pǐn)種(zhǒng)類(lèi)包(bāo)括有(yǒu)
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