Biotin-PEG7-NHS Ester 特點詳(xiáng)解(jiě)

一(yī)，分(fēn)子結構特點

Biotin-PEG7-NHS Ester是一種(zhǒng)異雙功能PEG生物偶聯試劑，分子由三個功(gōng)能模塊(kuài)組成。

生物素(sù)部(bù)分（Biotin）：分子量244.31，是(shì)一種水(shuǐ)溶(róng)性B族(zú)維生(shēng)素，能(néng)夠與鏈黴(méi)親和素(sù)（Streptavidin）或(huò)親和(hé)素(sù)（Avidin）形(xíng)成極(jí)其(qí)穩定(dìng)的(dí)非(fēi)共(gòng)價(jià)結合，結合常數Kd約(yuē)為10⁻¹⁵M，這種(zhǒng)超(chāo)高(gāo)親和力是目前(qián)已知較強的非(fēi)共價(jià)生物(wù)分子相互作用(yòng)之(zhī)一。每個(gè)鏈黴(méi)親(qīn)和素(sù)四聚體含(hán)有4個生物素(sù)結合位點(diǎn)，可實現多(duō)價(jià)信號(hào)放大。

PEG7連接(jiē)臂：由(yóu)7個乙二醇單元（–CH₂CH₂O–）重(zhòng)復(fù)組(zǔ)成，分子量約(yuē)306至(zhì)340Da，總長度約(yuē)10至(zhì)15Å。PEG鏈(liàn)具(jù)有(yǒu)高度柔(róu)韌(rèn)性(xìng)和(hé)親水(shuǐ)性，在分子(zǐ)中(zhōng)起到"柔性彈(dàn)簧(huáng)"的作用(yòng)，有效(xiào)隔(gé)離(lí)生物素(sù)與(yǔ)目(mù)標(biāo)蛋白表(biǎo)麵，大(dà)幅降低空(kōng)間(jiān)位阻效應(yīng)。同時(shí)PEG鏈(liàn)的親水(shuǐ)特性(xìng)顯著增(zēng)強了整個分(fēn)子的水溶性(xìng)，減(jiǎn)少非特(tè)異性吸(xī)附和蛋(dàn)白聚集。

NHS酯活(huó)性(xìng)基(jī)團：即N-羥基(jī)琥珀酰亞(yà)胺(àn)酯，是(shì)一種(zhǒng)高效的胺反(fǎn)應(yīng)性(xìng)官能團(tuán)。在pH 7.2至8.5條件(jiàn)下，NHS酯能(néng)與伯(bó)氨基(jī)（–NH₂）發生親(qīn)核取(qǔ)代反應，釋放N-羥基(jī)琥(hǔ)珀酰(xiān)亞胺(àn)，形(xíng)成(chéng)穩(wěn)定的(dí)酰(xiān)胺(àn)鍵（–NH–CO–）。反應速(sù)度快(kuài)，選(xuǎn)擇性好，條(tiáo)件溫(wēn)和，是蛋(dàn)白質化學修飾(shì)中較經典的活(huó)性基(jī)團(tuán)之一。

分子式(shì)為C₃₁H₅₂N₄O₁₃S，分子(zǐ)量(liáng)約720.83Da。

二(èr)，理化性質特(tè)點(diǎn)

外(wài)觀呈白色(sè)至淺(qiǎn)黃(huáng)色粉(fěn)末或固體，質地(dì)細(xì)膩。純度(dù)通常(cháng)≥95%（科研級(jí)）。

溶(róng)解性(xìng)方麵(miàn)，Biotin-PEG7-NHS Ester可溶(róng)於(yú)DMSO，DMF，二氯甲烷(wán)（DCM），氯仿(fǎng)等(děng)有(yǒu)機溶劑。由於PEG7鏈的(dí)親水作用(yòng)，在水中也有(yǒu)一定溶解(jiě)度，但NHS酯在水溶(róng)液中(zhōng)極(jí)易(yì)水(shuǐ)解，因(yīn)此不建議直(zhí)接用水(shuǐ)溶解幹粉，必須先用無水(shuǐ)DMSO或DMF配成(chéng)儲備(bèi)液。

化學穩(wěn)定(dìng)性(xìng)方麵，幹燥狀態(tài)下分(fēn)子整體(tǐ)穩定(dìng)。但(dàn)NHS酯(zhǐ)基團(tuán)對(duì)水(shuǐ)分(fēn)極度(dù)敏感(gǎn)，暴露(lòu)在(zài)潮(cháo)濕空氣中數(shù)分(fēn)鐘(zhōng)即(jí)開始(shǐ)水解(jiě)，在(zài)水(shuǐ)溶(róng)液(yè)中半(bàn)衰期(qī)僅數(shù)分鐘至(zhì)數小(xiǎo)時。幹(gān)燥粉末在-20℃密(mì)封避光條件下(xià)可穩定保(bǎo)存1年以上(shàng)，但開封(fēng)後(hòu)建(jiàn)議1至(zhì)3個(gè)月(yuè)內(nèi)用完(wán)。

熒光特(tè)性方麵，Biotin-PEG7-NHS Ester本(běn)身(shēn)無熒(yíng)光，需配合(hé)熒(yíng)光(guāng)標(biāo)記(jì)的鏈(liàn)黴(méi)親和素（如(rú)Streptavidin-FITC，Streptavidin-Cy3，Streptavidin-Cy5等）間接實現熒光(guāng)檢測。這(zhè)種(zhǒng)間接檢(jiǎn)測方(fāng)式(shì)的優(yōu)勢在於可(kě)以靈(líng)活更(gēng)換不同(tóng)熒(yíng)光(guāng)染料(liào)，實(shí)現(xiàn)多(duō)色(sè)實(shí)驗(yàn)，且(qiě)生(shēng)物(wù)素-鏈(liàn)黴親和素(sù)的(dí)信(xìn)號(hào)放大效(xiào)應(yīng)較(jiào)強，檢測靈敏(mǐn)度遠高(gāo)於(yú)直(zhí)接(jiē)熒(yíng)光標(biāo)記。

三(sān)，反應(yīng)性能(néng)特(tè)點(diǎn)

反應選(xuǎn)擇性高。NHS酯(zhǐ)在pH 7.2至8.5範(fàn)圍(wéi)內優(yōu)先與(yǔ)伯氨(ān)基(jī)反(fǎn)應(yīng)，對(duì)羥(qiǎng)基(jī)，羧(suō)基，巰(qiú)基等其他常見(jiàn)官(guān)能團幾(jī)乎無反(fǎn)應(yīng)活性，因此在(zài)含(hán)多(duō)種(zhǒng)官(guān)能團的生物分子(zǐ)中也(yě)能(néng)實現(xiàn)高(gāo)度(dù)選擇(zé)性標(biāo)記。主(zhǔ)要(yào)反(fǎn)應(yīng)位點(diǎn)是(shì)蛋白質(zhì)賴(lài)氨(ān)酸(suān)殘基的ε-氨基和多(duō)肽N端的(dí)α-氨基。

反(fǎn)應條件(jiàn)溫(wēn)和。偶聯反應在(zài)室溫(wēn)（20至(zhì)25℃）下即(jí)可(kě)進行(háng)，無需加(jiā)熱或添(tiān)加催化(huà)劑(jì)，適合(hé)對(duì)溫度敏(mǐn)感(gǎn)的(dí)酶，抗(kàng)體等(děng)生(shēng)物分(fēn)子。反(fǎn)應時(shí)間(jiān)通常(cháng)30分鐘至(zhì)2小(xiǎo)時(shí)，最長(cháng)不(bù)超過4小(xiǎo)時。

偶(ǒu)聯效(xiào)率(shuài)可(kě)控。通(tōng)過調節(jié)生物素(sù)與蛋白(bái)的(dí)摩(mó)爾比(bǐ)（通(tōng)常5:1至30:1），可以(yǐ)精(jīng)確(què)控製每(měi)個蛋白(bái)分(fēn)子(zǐ)上連接(jiē)的(dí)生物素(sù)數目。低(dī)比(bǐ)例（5:1至10:1）適合需要保(bǎo)留蛋(dàn)白活(huó)性(xìng)的(dí)功能研究(jiū)，中等(děng)比(bǐ)例(lì)（10:1至(zhì)20:1）較常(cháng)用，高比例（20:1至30:1）適(shì)合需(xū)要強信(xìn)號放大(dà)的檢(jiǎn)測(cè)實驗。

酰(xiān)胺(àn)鍵(jiàn)穩定性較高(gāo)。NHS酯與氨基(jī)形(xíng)成(chéng)的酰胺鍵在生理條件下(xià)極其穩定，不易水(shuǐ)解，保證了(liǎo)標(biāo)記(jì)產(chǎn)物(wù)在(zài)後續(xù)實驗(yàn)和儲存(cún)過程(chéng)中(zhōng)不會(huì)脫落(là)。

關(guān)於(yú)我(wǒ)們(mén):

陝(shǎn)西星(xīng)貝愛(ài)科(kē)生物科(kē)技經營(yíng)的(dí)產(chǎn)品種類(lèi)包括(kuò)有：合成(chéng)磷脂，高(gāo)分(fēn)子聚乙二(èr)醇(chún)衍(yǎn)生物(wù)，嵌(qiàn)段(duàn)共(gòng)聚物，磁(cí)性納(nà)米(mǐ)顆粒，納米金及納(nà)米金棒(bàng)，近紅外(wài)熒(yíng)光染料(liào)，活性熒(yíng)光染料，熒光標(biāo)記物，蛋(dàn)白交聯(lián)劑，小分(fēn)子PEG衍(yǎn)生物，點擊(jī)化(huà)學(xué)產(chǎn)品，樹(shù)枝(zhī)狀聚(jù)合(hé)物，環糊精衍生物(wù)，大環(huán)配體(tǐ)類(lèi)，熒光量子點(diǎn)，透明質(zhì)酸衍生物，石(shí)墨(mò)烯(xī)或(huò)氧(yǎng)化(huà)石(shí)墨烯，碳納米(mǐ)管，富勒(lè)烯(xī)，二(èr)氧化矽(guī)及介孔二(èr)氧化(huà)矽(guī)，聚(jù)合物微球，近(jìn)紅外(wài)熒光(guāng)染料(liào)，聚苯乙(yǐ)烯微球(qiú)，上轉換(huàn)納米發(fā)光(guāng)顆(kē)粒(lì)，MRI核(hé)磁(cí)造影產品(pǐn)，熒(yíng)光蛋(dàn)白及(jí)熒光(guāng)探(tàn)針等(děng)等(děng)。

溫(wēn)馨(xīn)提示(shì)：供(gōng)應產品(pǐn)僅(jǐn)用(yòng)於科研，不能用(yòng)於人(rén)體！

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